激光共聚焦顯微鏡豐富了人們對(duì)細(xì)胞生命現(xiàn)象的理解

　　激光共聚焦顯微鏡是一種先進(jìn)的細(xì)胞和分子生物學(xué)分析儀器，已被激光，電子照相機(jī)和計(jì)算機(jī)圖像處理等現(xiàn)代高科技手段所滲透，并與傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡相結(jié)合。它越來(lái)越多地用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，已經(jīng)成為生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中重要的工具。

　　傳統(tǒng)熒光顯微鏡使用熒光物質(zhì)標(biāo)記細(xì)胞中的特定結(jié)構(gòu)，這不僅增強(qiáng)了圖像和背景之間的對(duì)比度，而且還因?yàn)樵S多熒光顯微鏡使用短波長(zhǎng)紫外光，從而大大提高了分辨率（δ=0.61·λ/NA，其中δ是顯微鏡的分辨率；λ是照明光的波長(zhǎng)；NA是物鏡的數(shù)值孔徑。但是，當(dāng)觀察到的熒光樣本稍厚時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)傳統(tǒng)熒光顯微鏡無(wú)法克服的缺點(diǎn)：焦平面外的熒光結(jié)構(gòu)模糊且虛構(gòu)。原因是大多數(shù)生物標(biāo)本是具有不同水平的重疊結(jié)構(gòu)（例如耳蝸基底膜。它實(shí)際上是由外部毛細(xì)胞，各種支持細(xì)胞，神經(jīng)纖維等組成的空間結(jié)構(gòu)），并且焦平面在普通光學(xué)顯微鏡。如果熒光標(biāo)記的結(jié)構(gòu)分布在不同的水平并重疊在一起，則反射熒光顯微鏡不僅會(huì)收集來(lái)自焦平面的光量，而且物鏡還會(huì)接收來(lái)自焦平面上方或下方的散射熒光。熒光顯微鏡的光學(xué)分辨率該速率將大大降低。

　　基于傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡以激光為光源，采用共軛聚焦原理和裝置，并使用計(jì)算機(jī)對(duì)觀察對(duì)象進(jìn)行數(shù)字圖像處理觀察，分析和輸出。它的特征是對(duì)樣品進(jìn)行斷層掃描和成像，對(duì)細(xì)胞的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行非侵入式觀察和分析。同時(shí)，使用免疫熒光標(biāo)記和離子熒光標(biāo)記探針，該技術(shù)不僅可以觀察固定的細(xì)胞和組織切片，還可以實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察和檢測(cè)活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，分子，離子和生命活動(dòng)。亞細(xì)胞水平諸如Ca2+，pH值，膜電位和細(xì)胞形態(tài)變化等生理信號(hào)的觀察已成為形態(tài)學(xué)，分子細(xì)胞生物學(xué)，神經(jīng)科學(xué)，藥理學(xué)，遺傳學(xué)等領(lǐng)域的新一代強(qiáng)大的研究工具，激光共聚焦顯微鏡豐富了人們對(duì)細(xì)胞生命現(xiàn)象的理解。